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XTerra色譜柱使用窄徑柱和小粒徑柱的優(yōu)化建議

更新時(shí)間:2024-09-18      點(diǎn)擊次數(shù):652

a.使用窄徑柱(3.0mm內(nèi)徑)

  這部分內(nèi)容將介紹如何減小柱外效應(yīng)并提供如何在HPLC系統(tǒng)上使得窄徑柱達(dá)到最好的性能。一般來講3mm內(nèi)徑的窄柱不需要改變HPLC系統(tǒng)。然而,如果使用2.1mm內(nèi)徑的色譜柱則需要優(yōu)化HPLC系統(tǒng)以消除過多的系統(tǒng)譜帶擴(kuò)展體積,過大的系統(tǒng)譜帶擴(kuò)展體積會造成峰展寬,分離效果差,靈敏度降低。

 

b.系統(tǒng)譜帶擴(kuò)展對2.1mm內(nèi)徑的色譜柱的影響

  同樣的色譜柱,在譜帶擴(kuò)展體積為70μL的系統(tǒng)上塔板數(shù)為10,000;而在譜帶擴(kuò)展體積為100μL的系統(tǒng)上塔板數(shù)為8,000。

 

  提示:柱后分流器將引入額外的譜帶擴(kuò)展LC系統(tǒng)特別是有柱后分流器的系統(tǒng)優(yōu)化對于靈敏度和分離度是至關(guān)重要的。優(yōu)化的方法包括錐箍的深度適當(dāng),同時(shí)盡可能減小管路的內(nèi)徑和長度。圖9是一個LC/MS/MS系統(tǒng)優(yōu)化前后的差異,靈敏度和分離度都提高了一倍以上。

                                              image.png

 

c.有關(guān)優(yōu)化LC/MS/MS系統(tǒng)的建議

a)使用2.1mm內(nèi)徑色譜柱時(shí),請使用微徑檢測器流動池(說明:為了減小譜帶擴(kuò)展體積而縮短流動池的長度會導(dǎo)致檢測器靈敏度下降)。

 

b)盡可能減小進(jìn)樣器的loop環(huán)體積。

 

c)常規(guī)HPLC系統(tǒng)使用0.009英寸(0.25mm)的連接管路,使用2.1mm微徑柱的系統(tǒng)需要使用0.005英寸(0.12mm)的管路。

 

d)注意不同廠家色譜柱的不同,保證管路和色譜柱連接恰當(dāng)。

 

e)檢測器時(shí)間常數(shù)應(yīng)縮短為0.2秒以內(nèi)。

 

d.沃特世小顆粒填料(2.5μm)色譜柱-快速液相色譜

  沃特世公司2.5μm顆粒的色譜柱提供快速高效分離,并具有很好的柱壽命,以下內(nèi)容列出了使用2.5μm小顆粒色譜柱需要考慮的幾個因素:

  注意:裝填2.5μm小顆粒的色譜柱出口端的過濾片孔徑比進(jìn)口端小,因此不能將色譜柱進(jìn)行反沖。

 

a)流速:5μm顆粒的色譜柱相比,2.5μm顆粒的色譜柱具有更高的最佳流速,當(dāng)需要高柱效和快速分離時(shí)需要選擇這種色譜柱。當(dāng)然,高流速勢必會產(chǎn)生高的操作壓力。

提示:請根據(jù)所用LC系統(tǒng)的實(shí)際情況調(diào)節(jié)流速

 

b)反壓:對于同樣規(guī)格的色譜柱,2.5μm顆粒的柱壓比5μm顆粒要高很多。沃特世公司建議選擇較短的色譜柱,這樣還可以達(dá)到更快的分離。

 

c)溫度:可以使用較高的溫度來補(bǔ)償小顆粒造成的壓力升高,XTerra色譜柱的建議使用溫度是

20-60℃。

 

d)采樣速率:使用10點(diǎn)/秒以上的采樣速率,為了得到最佳的重現(xiàn)性,則需要最早流出的峰至少具有20個數(shù)據(jù)點(diǎn)。

 

e)檢測器時(shí)間常數(shù):對于快速分析,使用0.1秒以下的時(shí)間常數(shù)。


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