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Spherisorb色譜柱連接到HPLC系統(tǒng)的注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2024-09-06      點(diǎn)擊次數(shù):607

Spherisorb色譜柱連接到HPLC系統(tǒng)的注意事項(xiàng)

A.色譜柱接頭和系統(tǒng)管路注意事項(xiàng)

所有Spherisorb色譜柱都配備沃特世末端接頭。

Spherisorb分析柱所需的工具:

1/2英寸扳手

9/16英寸扳手

Spherisorb小柱所需的工具:

1/4英寸扳手

  小心拿取色譜柱。切勿讓色譜柱掉落或撞擊到堅(jiān)硬表面,因?yàn)檫@樣會擾亂柱床并且影響色譜柱性能。

 

1. 正確連接接入和接出色譜柱的1/16英寸外徑不銹鋼管路對于獲得高質(zhì)量色譜結(jié)果至關(guān)重要。

2. 使用標(biāo)準(zhǔn)不銹鋼壓力螺母接頭時(shí),確保其正確匹配1/16英寸外徑不銹鋼管路非常重要。擰緊或擰松壓力螺母時(shí),將5/16英寸扳手置于壓力螺母上,并將1/2英寸扳手置于色譜柱末端接頭的六角頭上。

  注:在這個(gè)過程中,如果任一扳手未正確放在色譜柱管路的搭扳手平面上,都會導(dǎo)致末端接頭松動滲漏。

3. 如果在不銹鋼壓力螺母接頭和色譜柱末端接頭之間出現(xiàn)滲漏,必須組裝新的壓力螺母接頭、管路和錐箍。

4. 色譜柱識別標(biāo)簽上的箭頭指示了正確的溶劑流向。正確連接接入和接出色譜柱的1/16英寸外徑不銹鋼管路對于獲得高質(zhì)量色譜結(jié)果至關(guān)重要。本應(yīng)成功的分離可能因色譜柱發(fā)生額外峰展寬而失敗,認(rèn)識到這一點(diǎn)非常重要。下文詳細(xì)介紹了如何選擇合適的色譜柱接頭和系統(tǒng)管路。由于缺乏行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),不同色譜柱制造商使用了不同類型的色譜柱接頭。如果色譜柱末端接頭的類型與現(xiàn)有的管路接頭設(shè)置不匹配,可能對色譜分離性能產(chǎn)生負(fù)面影響。下文將解釋沃特世和Parker的錐箍及末端接頭之間的差別(1)。不同類型的末端接頭要求管路伸出錐箍的長度不盡相同。Spherisorb色譜柱配備的沃特世末端接頭要求管路伸出錐箍0.130英寸。如果您目前使用的是Parker色譜柱,則在安裝Spherisorb色譜柱前必須重置錐箍深度以獲得理想性能。

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  管路/色譜柱連接正確時(shí)(2),管路應(yīng)接觸到色譜柱末端接頭的底部,二者之間不應(yīng)有死體積。

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  流路中存在死體積會影響色譜柱性能。如果將Parker錐箍連接至沃特世末端接頭,就可能出現(xiàn)這種情況(3)。

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  注:如果將裝有Parker錐箍的管路連接到沃特世色譜柱上,會出現(xiàn)死體積。

  只有一種方法可以解決這個(gè)問題:切斷裝有錐箍的管路末端,在管路上安裝新的錐箍并重新連接。在擰緊螺母前,請確保管路接觸到色譜柱末端接頭的底部。相反,如果是將裝有沃特世錐箍的管路連接到帶Parker末端接頭的色譜柱,則管路末端在錐箍到達(dá)合適的密封位置之前就會接觸到底部。這會留下空隙并造成滲漏(4)。

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  注:如果將沃特世錐箍連接到裝有Parker末端接頭的色譜柱上,會導(dǎo)致滲漏。

 

有兩種方法可以解決這個(gè)問題:

1. 進(jìn)一步擰緊螺母。這樣錐箍會向前移動并到達(dá)密封表面。切勿過度擰緊,因?yàn)檫@樣可能會損壞螺母。

2. 切斷管路,更換錐箍并重新連接。

 

B. 盡可能減小譜帶展寬

  5顯示了管路內(nèi)徑對系統(tǒng)譜帶展寬以及峰形的影響。由圖可見,管路內(nèi)徑較大會引起峰展寬和靈敏度降低。

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  典型HPLC系統(tǒng)的譜帶展寬體積應(yīng)為100 μL ± 30 μL(或方差為400 μL2 +/- 36 μL2)。微內(nèi)徑(內(nèi)徑2.1 mm)系統(tǒng)的譜帶展寬體積不應(yīng)超過20~40 μL(或方差不超過16 μL2~64 μL2)

 

C. 測量系統(tǒng)體積

  系統(tǒng)體積對于放大分離非常重要,因?yàn)樗鼤诿看芜\(yùn)行開始時(shí)產(chǎn)生一段等度保持。在小規(guī)模分離中,這段等度保持通常是數(shù)倍色譜柱體積,但對于制備型分離,等度保持可能只占制備級色譜柱體積的一部分。設(shè)計(jì)放大實(shí)驗(yàn)時(shí)必須考慮補(bǔ)償該體積,以避免色譜峰畸變(7)。

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1. 取下色譜柱。

2. 使用乙腈作為流動相A,含0.05 mg/mL尿嘧啶的乙腈作為流動相B(消除無添加劑混合和粘度問題)。

3. UV檢測器波長設(shè)置為254 nm。

4. 在目標(biāo)儀器上運(yùn)行初始方法的流速和預(yù)期流速。

5. 采集運(yùn)行100%流動相A時(shí)的基線5 min。

6. 將梯級設(shè)置為5 min后變?yōu)?/span>100%流動相B,然后繼續(xù)采集數(shù)據(jù)5 min。

7. 測量100%流動相A100%流動相B之間的吸光度差值。

8. 測定該吸光度差值的50%處的時(shí)間。

9. 計(jì)算梯度起點(diǎn)與50%點(diǎn)之間的時(shí)間差值。

10. 將時(shí)間差值乘以流速。


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